15版药典增补版-疫苗佐剂氢氧化铝对牛血清白蛋白的吸附率解决方案

紫外可见分光光度法测定疫苗佐剂氢氧化铝对牛血清白蛋白的吸附率

1.指导通则信息

1.1 依据指导通则号：3701氢氧化铝佐剂（2015版中国药典增补版三部生物制品新增指导通则部分【3.6 吸附率】）

1.2 指导通则名称：3701氢氧化铝佐剂

1.3 指导通则适用范围：疫苗佐剂氢氧化铝（包括原位吸附疫苗的铝稀释制剂）的质量控制

1.4 指导通则发布时间：2018年7月19日

1.5 指导通则实施时间：2019年1月1日

1.6 发布单位：国家药典委员会

2.吸附率项目标准正文

3.6 吸附率

        以氢氧化铝对牛血清白蛋白的吸附作用计算吸附率。

       2.1  供试品溶液制备：取供试品适量，用生理氯化钠溶液稀释至铝含量为1mg/mL，调节pH值至6.0~7.0，即为供试品溶液。同一种铝佐剂不同批次的pH值应调节为固定值，以保证不同批次检测的批间一致性。

        2.2 牛血清白蛋白（简称牛白）溶液：取牛血清白蛋白适量，用生理氯化钠溶液配置成10mg/ mL溶液，调节pH与供试品溶液pH一致。

       2.3  测定法：取15mL离心管5支，分别加牛血清白蛋白溶液（10mg/ mL）0.08 mL、0.16 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL，并补生理氯化钠溶液至4.0 mL，混匀后，每管分别加入供试品溶液1.0 mL，混匀，使各管牛血清白蛋白分别为0.8 mg、1.6 mg、4 mg、8 mg、12 mg，各管铝为1 mg。

       2.4  将上述各管室温放置1小时（期间每隔10分钟用力振摇1次）后，5000g离心10分钟收集上清液，采用Lowry法（通则0731）或其它适宜方法测定各管上清液中游离牛血清白蛋白含量，记录各管OD值并计算蛋白含量，以各管上清液游离的牛血清白蛋白含对应其牛血清白蛋白总量计算各管吸附率（A）。上清液体积按5 mL计算。

         吸附率（A）%=100×（牛血清白蛋白总量－上清液游离蛋白含量）/牛血清白蛋白总量

       2.5  结果判定：牛白含量为0.8 mg、1.6 mg的2管上清蛋白应为未检出，即吸附率应不低于90%；且牛白含量为4 mg、8 mg、12 mg各管OD值应成总体递增趋势（如OD值无法判定，需通过检测上清蛋白含量判定总体递增趋势），吸附率判为合格。

        2.6 如供试品铝含量低于1 mg/ mL，可按适当比例调整上述各管铝含量和牛白含量后进行。结果判定以每1mg  铝吸附1.6 mg牛白的吸附率应不低于90%（即上清蛋白未检出），且每1 mg铝与更高浓度牛白吸附时，随牛白含量的递增各管OD值应呈总体递增趋势（如OD值无法判定，需通过检测上清蛋白含量判定总体递增趋势），吸附率判为合格。

3.分析方法简述

        根据标准正文内容，上清液游离蛋白含量采用Lowry法或其它适宜方法，2015版药典四部0731蛋白质含量测定法中提到福林酚法（Lowry）或其它方法共6种，均采用紫外分光光度计来进行分析检测。方法相关信息如下表所示：

4.仪器配置方案

根据标准解析内容，推荐以下适用的产品：